慢病毒滴度快速檢測卡說明書

上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實驗試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時，把好生物產業(yè)鏈中的國產生物試劑品質關。未來讓每一個和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國生物制造企業(yè)，圓夢中國。

產品詳情

產品描述

      本產品是采用膠體金免疫層析技術快速檢測分泌到慢病毒包裝上清中的游離囊蛋白P24，以此作為一個靈敏的、間接的替代指標來顯示病毒產量的檢測卡，通過對囊蛋白 P24 的檢測，能快速確定包裝液中的慢病毒滴度是否已經達到收獲需要。該方法僅需要 5~10min 即可得到結果，與傳統(tǒng)轉染方法需要花費2-3天相比，具有明顯優(yōu)勢。

產品性質

關于慢病毒滴度

一個慢病毒顆粒（Lentiviral Particle, LP）中約有 2000 個 P24 蛋白分子，用以下公式可以計算慢病毒載體的顆粒數(shù)（LP）：

一個 LP 相當于：2000×24×10^3/(6×10^23)g of P24=8×10^-5 pg of P24；或者說，1ng P24=1.25×10^7 LPs（≈1.25×10^4-5 TU**）

正常情況下，每 100-1000 LPs 中會有 1 個具有感染活性的病毒載體，即 1 TU（Transducing Unit）。

注意：上述公式計算得到的 LP 值是理論值，檢測樣品中含有的游離的 P24 蛋白可能會使該值偏高。

提示：通常上清中病毒含量需要超過 10^6 TU/ml，才能確保濃縮純化后得到足夠濃度的慢病毒載體（一般能濃縮 150 倍左右）。

本法給出的是檢測線（T 線）強度與功能滴度（Infectious Unit/mL, IFU/mL 或 Transduction Unit/mL, TU/mL）而非物理滴度（Viral Particle/mL, VP/mL）的相關性。這一相關性與病毒所轉染的細胞有關。例如，上圖中，用 3 倍連續(xù)稀釋的包裝上清轉染 HEK293 細胞。72 小時后，在熒光顯微鏡下觀察表達 ZsGreen1 的細胞，并用流式細胞儀測定HEK293 細胞的轉染率，得到功能滴100µL 滴度為 2 10 6 IFU/ml 的包裝上清加到樣品孔中，10 分鐘后顯深紅色“T 線"。

使用方法

使用方法

1. 打開包裝取出檢測卡，平放在實驗臺上；

2. 用微量移液器吸取加 80~100µL 包裝上清,滴加到加樣

結果判定

1. 在可視窗口中，質控線（C）和檢測線（T）均顯色即為陽性；

2. 質控線（C）顯色，檢測線（T）不顯色，檢測結果為陰性；

3. 根據(jù) P24 含量的多少，（T）線顏色有所不同，含量越高，顏色越深；含量越低，顏色越淺；

4. 質控線（C）不顯色，無論檢測線 （T）是否顯色，檢測無效；

注意事項

1. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2. 本產品主要用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。

運輸及保存方法

常溫，有效期18個月。

注意：

1. 如果組織培養(yǎng)基的顏色導致高背景，可追加 如果組織培養(yǎng)基的顏色導致高背景，可追加 40~60μ μl PBS 以清除背景；

2. 試劑卡不建議凍存；

3. 本檢測卡僅限于科研使用。